Étude des modifications post-traductionnelles de la protéine de capside ORF2 du virus de l'hépatite E (HEV)

Abstract

L’infection par le virus de l’hépatite E (HEV) est un problème majeur de santé publiquequi touche plus de 20 millions de personnes et tue environ 70 000 chaque année à travers lemonde. Le HEV est la cause majeure d’hépatite virale aiguë dans le monde. En France, laséroprévalence du HEV est de 22,4% dans la population générale. Ce virus se transmet parvoie féco-orale ou par consommation de viande contaminée mal cuite. Très récemment, nousavons décrit un système de culture cellulaire permettant d’amplifier efficacement le HEV. Cesystème représente un outil unique pour caractériser les différentes étapes du cycle infectieuxdu HEV qui sont très mal connues à ce jour. Dans le cadre de ma thèse, je me suis intéresséplus particulièrement à la protéine de capside ORF2 qui est l’unité structurale des particulesvirales et est donc un acteur central du cycle infectieux du HEV. La protéine ORF2 est uneprotéine de 660 acides aminés (aa) qui possède un peptide signal (PS) et trois sites potentielsde N-glycosylation (N1, N2 et N3). J’ai donc étudié le rôle de la N-glycosylation de cetteprotéine ORF2 dans le cycle infectieux du HEV. Pour atteindre cet objectif, la soucheinfectieuse HEV-p6 génotype 3 a été utilisée pour infecter les cellules de la lignéehépatocytaire PLC3, sous clone de la lignée PLC/PRF/5. Les résultats obtenus ont montré quela protéine ORF2 est N-glycosylée uniquement au niveau des sites N1 et N3 ; le site N2 estdéfavorable à la N-glycosylation. Nos résultats ont montré que la N-glycosylation de laprotéine ORF2 n’est pas importante pour sa stabilité, son oligomérisation, sa reconnaissancepar des anticorps, l’assemblage et l’infectiosité des particules virales. Nous avons aussimontré que la protéine ORF2 est importée dans le noyau des cellules hôtes au cours du cycleinfectieux du HEV de manière indépendante de la N-glycosylation. Nous avons identifié pourla première fois un signal de localisation nucléaire (NLS) fonctionnel en position N-terminalede la protéine ORF2 lui permettant d'interagir probablement avec l’importine alpha1. Demanière surprenante, ce NLS régule non seulement l’import nucléaire de cette protéine virale,mais aussi sa translocation réticulaire. Nous avons également démontré que la protéine ORF2est exportée du noyau des cellules hôtes en interagissant avec l’exportine1 et possède 3signaux d’export nucléaire (NES) en position C-terminale. Ces résultats améliorent laconnaissance du trafic intracellulaire de la protéine ORF2 et pourraient orienter les stratégiesantivirales dirigées contre le HEV.